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淋巴細胞分離液使用說明

更新時間:2011-03-09      瀏覽次數:994
使用說明
    1.在離心管中加入適量淋巴細胞分離液。
  2.取抗凝血與等量Hank’s液或平衡鹽溶液充分混勻,用滴管沿管壁緩慢疊加于分層液面上,注意保持兩液面界面清晰,水平離心2000rpm×20分鐘。
  3.離心后,管內液體分為三層,上層為血漿和Hank’s液,下層主要為紅細胞和粒細胞。中層為淋巴細胞分離液,在中上層液面處有一白色云霧層狹窄帶,即為富含淋巴細胞和單核細胞的單個核細胞(PBMC)及血小板。
    4.吸去zui上層的血漿,收集血漿層和淋巴細胞分離液交界面的單個核細胞,盡量全部吸出PBMC,移入一新的離心管中;
    5.加入Hanks’液或無血清培養(yǎng)液,混勻后離心200×g 10分鐘,棄去上清液(低速離心有利于去除細胞懸液中留存的血小板)。
    6.再用同樣洗滌液洗滌細胞2次,每次離心500×g 10分鐘,以洗去殘留的淋巴細胞分離液。再用細胞分離液將細胞調配成適當濃度。通常,每毫升外周血可得1~2×106PBMC